ANÁLISIS BIOQUÍMICO

08.01.2020 OBJETIVO Determinar de forma cuantitativa los triglicéridos presentes en una muestra de suero del paciente, ya que los triglicéridos incubados con lipoprotenlipasa liberan glicerol y ácidos grasos libres, el glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y adenosina 5 difosfato. El glicerol-3-fosfato es convertido a dihidroxiacetona fosfato y peróxido de hidrógeno. Finalmente el H2O2 reacciona con 4-aminofenazona y p-clorofenol, reacción catalizada por la peroxidasa dando una coloración roja. Además la intensidad del color es proporcional a la concentración de triglicéridos presentes. FUNDAMENTO Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula. Al igual que el colesterol son transportados a las células por las lipoproteínas en la sangre. Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar sus niveles, pero también aumenta debido a disfunciones hepáticas...

18.12.19 OBJETIVO Detectar en suero humano un auto-Ac tipo IgM o tipo IgG antimitocondriales dirigidos contra determinados Ags FUNDAMENTO Se basa en el principio de enzimoinmunoanalisis. Cada tira está compuesta por una membrana fijada sobre un soporte plástico, en la cual se dispensan los Ags. Si los sueros contienen los auto-Acs buscados se unirán al correspondiente Ag de los fijados en la membrana. Mediante un lavado eliminaremos el exceso de Ac que no se ha unido al Ag. El conjugado se une a los complejos Ag-Ac. Después se realiza un segundo lavado para eliminar el exceso de conjugado, se añade un sustrato que contiene la enzima ALP, desarrollará una coloración púrpura.  El color tendrá una intensidad directamente proporcional a la cantidad de Ac presente en la muestra Material necesario: Matraz erlenmeyer Micropipeta y puntas Reactivos: Tampón de lavado concentrado 10x Tiras dot: 24 unidades Tampón de dilución: tampón amarillo Conjugado Sustrato ...

12.12.19 OBJETIVO Cuantificar la hemoglobina glicosilada por cromatografía en columna FUNDAMENTO Esta práctica se basa en mezclar una alícuota de sangre completa con un agente hemolizante para obtener la lisis de os hematíes, la liberación de la Hb contenida en ellos y la eliminación de la fracción lábil.  La fracción A1c de lahemoglbina glicosilada es separada por la Hb A1A + B mediante cromatografía de intercambio catiónico. El porcentaje de hemoglobina se obtiene por comparación de la absorbancia del fluido con la absorbancia de la hemoglobina total. Material necesario: Tubos de ensayo de 10 mL Tubos eppendorf Gradillas Micropipetas y puntas Reactivos: R1: Biftalato de potasio R2: Tampón 42 mmol/L R3: Tampón 50 mmol/L Columna de cromatografía NOTA: Es importante usar los reactivos y columnas del mismo lote. Muestra: Sangre completa con EDTA PROCEDIMIENTO Se enciende el espectrofotómetro y se selecciona la longitud de onda que nos indica ...

04.12.19 OBJETIVO El objetivo va a ser cuantificar los niveles de proteínas sanguíneas desconocidos. FUNDAMENTO La inmunodifusión radial es una técnica cuantitativa muy sensible que se usa para detectar los niveles de determinadas proteínas sanguíneas de los pacientes. Material necesario: Placa de Petri pequeña Micropipetas y puntas 10 cortadores para pocillos (well cutters) Microondas Baño termostático Probeta de 200 mL  Matraz aforado de 150 mL Estufa de incubación Reactivos Solución de Ac. Solución de Ag estándar. Agarosa Tampón en polvo Proteína de concentración desconocida PROCEDIMIENTO 1. Preparación del tampón Un grupo de clase preparó el tampón, para ello se vertió 200 mL de agua destilada en una probeta y se vertió a un matraz erlenmeyer, luego se vertió el componente D (buffer) sobre el agua y se mezcló bien con una varilla. 2. Preparación de agarosa Otro grupo de clase preparó la agarosa, para ello se empleó...