PRÁCTICA 14: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE TRIGLICÉRIDOS
08.01.2020
OBJETIVO
Determinar de forma cuantitativa los triglicéridos presentes en una muestra de suero del paciente, ya que los triglicéridos incubados con lipoprotenlipasa liberan glicerol y ácidos grasos libres, el glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y adenosina 5 difosfato. El glicerol-3-fosfato es convertido a dihidroxiacetona fosfato y peróxido de hidrógeno.
Finalmente el H2O2 reacciona con 4-aminofenazona y p-clorofenol, reacción catalizada por la peroxidasa dando una coloración roja.
Además la intensidad del color es proporcional a la concentración de triglicéridos presentes.
FUNDAMENTO
Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula. Al igual que el colesterol son transportados a las células por las lipoproteínas en la sangre.
Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar sus niveles, pero también aumenta debido a disfunciones hepáticas, diabetes...
Material necesario:
Reactivos:
PROCEDIMIENTO
Lo primero es encender el baño para que alcance la temperatura deseada cuando vayamos a incubar y también se enciende el espectrofotómetro y lo ajustamos a la longitud de onda que nos da el protocolo, que es de 505 nm.
Luego mezclamos el vial R2 con el de R1 para de esta forma crear nuestro reactivo de trabajo (RT).
Seguidamente colocamos tubos de ensayo en una gradilla y rotulamos con B (blanco), P (patrón) y los otros con las iniciales de cada persona (que es la muestra).
Tras ello dispensamos 1 mL de RT en cada uno de los tubos.
Luego pipeteamos en el tubo P 10 μL de patrón Cal. Y luego cada uno pipetea 10 μL de suero de paciente en cada uno de sus tubos y homogeneiza.
Una vez realizado eso se incubó 5 minutos a 37ºC en el baño.
Cuando terminó el tiempo pasamos el contenido de los tubos a cubetas de espectrofotometría y primero ajustamos el blanco, luego calculamos la absorbancia del patrón que fue de 0.349 y por último la muestra que en mi caso fue de 0.334.
Con estos datos obtenemos el resultado a través de la siguiente fórmula:
(Amuestra/Apatrón) x 200
(0.334/0.349) x 200= 191.4 mg/dL
Tras esto podemos concluir que como los valores de referencia son los siguientes dicha muestra es patológica, ya que tiene una concentración alta de triglicéridos.
OBJETIVO
Determinar de forma cuantitativa los triglicéridos presentes en una muestra de suero del paciente, ya que los triglicéridos incubados con lipoprotenlipasa liberan glicerol y ácidos grasos libres, el glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol 3 fosfato y adenosina 5 difosfato. El glicerol-3-fosfato es convertido a dihidroxiacetona fosfato y peróxido de hidrógeno.
Finalmente el H2O2 reacciona con 4-aminofenazona y p-clorofenol, reacción catalizada por la peroxidasa dando una coloración roja.
Además la intensidad del color es proporcional a la concentración de triglicéridos presentes.
FUNDAMENTO
Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula. Al igual que el colesterol son transportados a las células por las lipoproteínas en la sangre.
Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar sus niveles, pero también aumenta debido a disfunciones hepáticas, diabetes...
Material necesario:
- Espectrofotómetro
- Cubetas de espectrofotometría
- Micropipeta de 10 μL y de 1000 μL
- Tubos de ensayo
- Gradillas
- Baño termostático.
Reactivos:
- R1: Tampón
- R2: Enzimas
- Trigliceridos Cal (patrón primario acuoso de triglicéridos)
- Suero heparinizado o EDTA.
PROCEDIMIENTO
Lo primero es encender el baño para que alcance la temperatura deseada cuando vayamos a incubar y también se enciende el espectrofotómetro y lo ajustamos a la longitud de onda que nos da el protocolo, que es de 505 nm.
Luego mezclamos el vial R2 con el de R1 para de esta forma crear nuestro reactivo de trabajo (RT).
Seguidamente colocamos tubos de ensayo en una gradilla y rotulamos con B (blanco), P (patrón) y los otros con las iniciales de cada persona (que es la muestra).
Tras ello dispensamos 1 mL de RT en cada uno de los tubos.
Luego pipeteamos en el tubo P 10 μL de patrón Cal. Y luego cada uno pipetea 10 μL de suero de paciente en cada uno de sus tubos y homogeneiza.
Una vez realizado eso se incubó 5 minutos a 37ºC en el baño.
Cuando terminó el tiempo pasamos el contenido de los tubos a cubetas de espectrofotometría y primero ajustamos el blanco, luego calculamos la absorbancia del patrón que fue de 0.349 y por último la muestra que en mi caso fue de 0.334.
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| Absorbancia de mi muestra |
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| Absorbancia patrón |
Con estos datos obtenemos el resultado a través de la siguiente fórmula:
(Amuestra/Apatrón) x 200
(0.334/0.349) x 200= 191.4 mg/dL
Tras esto podemos concluir que como los valores de referencia son los siguientes dicha muestra es patológica, ya que tiene una concentración alta de triglicéridos.
- Hombres: 40 - 160 mg/dL
- Mujeres: 35 - 135 mg/dL
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