PRÁCTICA 5: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE GLUCOSA

OBJETIVO

Con esta práctica de la glucosa oxidasa (GOD) vamos a obtener la cantidad de glucosa en suero sanguíneo, y de esta forma practicar más con el espectrofotómetro.

PRINCIPIO

La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. El H2O2 producido se detecta mediante un aceptor cromogénico de oxígeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa.

FUNDAMENTO

La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las células.
La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia causada por un déficit de insulina.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

Reactivos;

• Tampón (R1)
• Enzimas (R2)
• Glucosa CAL

Material necesario:

• Gradillas
• Micropipetas y puntas
• Vaso de desechos
• Tubos de ensayo

R1 y R2

Patrón

PROCEDIMIENTO:

1. Preparar el reactivo de trabajo (RT):

Para ello disolvemos el contenido de un vial R2 (enzimas) en un frasco de R1 (tampón)

Tapamos y lo mezclamos de forma suave hasta disolverlo, y lo volvimos a echar al otro frasco.

NOTA: Esto solo fue preciso realizarlo una vez, así que ya lo fuimos repartiendo por los grupos de clase.

Mezclando R1 y R2 

2. Preparar blanco, patrón y muestras

Solo era necesario un blanco y un patrón por grupo, y la muestra si debió hacer una cada una, para ello realizamos lo siguiente:

Dispusimos los tubos en una gradilla y rotulados 

Preparamos el blanco echando 1 mL de RT con una micropipeta, luego echamos para el patrón 1 mL de RT y 10 µL de patrón. 

Luego cada uno hizo su muestra, en la cuál echamos en un tubo 1 mL de RT y 10 µL de muestra (suero sanguíneo), homogeneizando bien.

Al poco tiempo pudimos observar como se formó color

Cogiendo la muestra

Depositando muestra

Muestras aún sin color

Ya se puede observar el color

3. Seguidamente lo tapamos con tapones y pusimos los tubos en su gradilla en el baño termostático durante 10 minutos a 37ºC

4. Pasado dicho tiempo pasamos a leer la absorbancia

Para ello primero ajustamos el blanco, luego realizamos las medidas del patrón, su absorbancia fue 0.546.

La absorbancia de mi muestra fue de 1.184

5. Y ya calculamos la concentración:

(Absorbancia muestra - blanco / Absorbancia patrón - blanco ) x 100 

NOTA: Como hemos ajustado el blanco no hace falta restarlo

(1.184/0.546) x 100 = 216.85 mg/dL

Absorbancia de una de las muestras del grupo

Absorbancia del patrón

OBSERVACIONES

Es cierto que el valor del patrón nos dio algo alto aunque la concentración si es adecuada, esto puede ser debido a que pasó un tiempo entre que hicimos el patrón y lo pusimos a incubar por lo que hubiera sido necesario menos tiempo de incubación. Lo tendremos en cuenta para sucesivas prácticas