PRÁCTICA 9. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES POR EL MÉTODO DE BIURET

18.11.19

OBJETIVO

El método de Biuret es una prueba para la determinación de proteínas totales que tiene como fin su análisis basándose en la capacidad que tienen los enlaces peptídicos de unirse a sales cúpricas en medio alcalino, dando lugar a un precipitado coloreado de color azul-violáceo. Es la técnica de referencia de proteínas totales. Además debe haber mínimo dos enlaces peptídicos por lo que no se pueden utilizar en dipéptidos ni en aminoácidos.
Por lo que el objetivo de esta práctica sería saber realizar correctamente este método de referencia tan importante para las proteínas totales.

FUNDAMENTO

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, que actúan como elementos estructurales y de transporte.
Su determinación es útil en la detección de:

• Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o aumento de proteínas específicas.
• Hipoproteinemias por hemodilución debido a defecto de síntesis proteico, etc.

Material necesario:

• Gradillas
• Tubos de ensayo
• Espectrofotómetro
• Pipetas y puntas

Reactivos:

• R (biuret).  

_Potasio sodio tartrato

_Yoduro sódico

_ Yoduro de potasio

_ Sulfato de cobre (II)

_ Hidróxido de sodio

• Protein Cal (patrón)
• Muestra. (suero)

PROCEDIMIENTO

Lo primero que hicimos fue encender el espectrofotómetro y tras un rato seleccionamos nuestra longitud de onda deseada que es de 540 nm.

Luego nos pusimos a preparar nuestro blanco, el patrón por mesa y cada persona su muestra para realizar luego su medida de absorbancia.

Para realizar el blanco pusimos 1 mL de R en ese tubo al que rotulamos como blanco.

Seguidamente se coge 1 mL de R y 25 μL de patrón.

Y ya por último realicé el tubo de mi muestra el cual llevaba 1 mL de R y 25 μL de muestra. Tras ello esperamos 10 minutos.

Con todo listo fuimos al espectrofotómetro y medimos:

Primero ajustamos el blanco. Seguidamente el patrón que nos dio una absorbancia de 0.529 y luego la muestra que dio 0.371.

Realizando los cálculos y multiplicando por el factor que nos da el protocolo el cual es 7 obtenemos la siguiente ecuación:

(Am/Ap) x 7

(0.371/0.529)x7 = 4.9 g/dL    Este sería la concentración de la muestra.

Añadiendo Reactivo R

Añadimos R al tubo de blanco

Añadiendo Protein Cal

Añadiendo muestra

Absorbancia de la muestra