PRÁCTICA 22: ESTUDIO MICROSCÓPICO DE PRINCIPIOS INMEDIATOS EN HECES

19.02.2020

OBJETIVO

Observar macroscópica y microscópicamente una muestra problema de heces.

FUNDAMENTO

La investigación de los principios inmediatos que aparecen digeridos en las heces debe realizarse a nivel macroscópico y microscópico.

En una primera etapa, se realiza un análisis a simple vista de las heces, extendiendo una porción de la muestra sobre una placa de Petri y observando su consistencia, color, olor, forma, viscosidad, etc. También se buscan trozos de carne, fragmentos de fécula, grasas neutras, moco, pus y sangre que puedan darnos alguna indicación de anormalidad de digestión.

Es importante tener en cuenta la existencia de elementos que pueden entorpecer este análisis, como lo son la presencia de artefactos o restos alimenticios difícilmente digeribles. Después del análisis macroscópico, se debe realizar una preparación para su posterior observación al microscopio óptico.

Material y reactivos

• Vaso de plástico desechable
• Espátula
• Microscopio
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Mechero

Reactivos:

• Lugol
• Sudan III
• Agua destilada

Muestra: Heces recogidas con un máximo de 12 horas antes del análisis que deben conservarse refrigeradas a 4 grados para evitar la proliferación bacteriana.

PROCEDIMIENTO

Preparación del lugol

Lo realizamos nuestro grupo en la que usamos una dilución al 1/3 con 5 mL de Lugol y 10 mL de agua destilada y lo mezclamos bien en un matraz Erlenmeyer. Posteriormente fue alicuotado para cada grupo de clase.

Preparación de Sudán III

Lo realizço otro grupo de clase donde se mezcló 0.5 g de Sudan III con 45 mL de etanol 96º luego se calentó brevemente en el microondas y se dejó efriar, una vez frio se filtró y se realizaron alícuotas para cada grupo de clase.

Técnica

En un tubo de centrífuga rellenamos con 10 mL de agua destilada y depositamos una pequeña cantidad de heces (del tamaño de un garbanzo) con ayuda de una pipeta Pasteur y la depositamos en el tubo y mezclamos con ayuda de un vórtex hasta que quedó homogéneo, luego se repartió esa mezcla en 2 tubos de centrífuga más con el fin de contaminar con almidón una de ellas y la otra con grasas (aceite) para que se puedan apreciar bien con lugol y Sudan III respectivamente.

Seguidamente se coge la muestra sin adulterar con una pipeta pasteur y se deposita una gota en un porta, y se tapa con un cubre para su observación en fresco.

Luego se cogió una gota de la muestra contaminada con almidón y se le echó 2 gotas de lugol y se tapó con cubreobjetos

Y por último se calienta primeramente en un mechero de alcohol un poco el portaobjetos para la observación con Sudán. Una vez caliente depositamos una gota de muestra contaminada con grasas y dos gotas de Sudán III.

OBSERVACIÓN

Portaobjetos en fresco: Solo se aprecian restos vegetales, fibras...

Portaobjetos con Lugol: Se pueden observar los hidratos de carbono bajo la forma de almidón, los cuales se tiñen de color azul o negro debido a que han sido mal digeridos. 

Preparación con Sudan III caliente: La presencia de grasas neutras y ácidos grasos se aprecia como círculos de color rojo anaranjado.