PRÁCTICA 20: BILIRRUBINA DIRECTA

06.02.2020

OBJETIVO

Determinar la concentración de bilirrubina total en una muestra de suero para determinar si sus valores se encuentran dentro de los valores de referencia.

PRINCIPIO DEL MÉTODO

La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado midiéndose fotometricamente. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, solo la primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la solubilización con dimetilsulfóxido (DMSO) para que reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la muestra ensayada

SIGNIFICADO CLÍNICO

La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina. Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis. La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma. 

Causas más probables de la hiperbilirrubinemia: 

• Bilirrubina Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteraciones eritropoyeticas, presencia de drogas. 
• Bilirrubina Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas. El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS

Material necesario:
Gradillas
Tubos de ensayo
Micropipetas y puntas
Espectrofotómetro

MUESTRAS

Suero o plasma libre de hemólisis.

PROCEDIMIENTO
Primero pusimos el espectrofotómetro con una longitud de onda de 555 nm y seguidamente pipeteamos en una cubeta lo siguiente:

Hacemos un blanco de muestra para eliminar sus interferencias, por tanto añadimos 100 μL muestra.Seguidamente medimos el patrón y las muestras y mediante la fórmula obtuvimos los resultados, en mi caso fue de 0.54

NOTA: Cuando añadimos la muestra deben pasar 5 minutos hasta la medición de la absorbancia, y tambien es importante no excedernos de ese tiempo. El patrón tenia absorbancia de 0,336. La formula es (A muestra/ A patrón) x concentración del calibrador (que es 0.72 mg/dL) 

(0.093/0.122) x 0.72 = 0.54 mg/dL

 

Para obtener la bilirrubina libre o indirecta, restamos la bilirrubina total obtenida en la practica anterior menos la directa obtenida ahora:

BILIRRUBINA TOTAL - BILIRRUBINA DIRECTA = BILIRRUBINA INDIRECTA

0.88 - 0.54 = 0.34 mg/dL