PRACTICA 17:DETERMINACION CUANTITATIVA DE COLESTEROL HDL

30.01.2020 PRINCIPIO DEL MÉTODO.

Determinación directa del HDLc (colesterol de lipoproteínas de alta densidad) sin necesidad de pre-tratamiento o centrifugado de la muestra. La determinación se realiza en dos pasos: 

1º Eliminación de lipoproteínas no-HDL.

2º Medición de HDLc.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de HDLc presente en la muestra ensayada. 

SIGNIFICADO CLÍNICO.

Las partículas de HDL son lipoproteínas de alta densidad que transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado. Debido a que las HDL pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de vuelta al hígado para su excreción, se les conoce como el colesterol o ‘lipoproteína buena’, ya que niveles elevados están relacionados con un menor riesgo cardiovascular. Un nivel bajo de colesterol HDL es considerado uno de los principales factores de riesgo cardiovascular y enfermedades de las arterias coronarias.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS.

MATERIAL ADICIONAL.

Espectrofotómetro o analizador con cubeta para lecturas a 570 nm. 

Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 

Equipamiento habitual de laboratorio. Micropipetas y puntas Tubos de ensayo Gradillas Baño termostático

MUESTRAS.

Suero 

PROCEDIMIENTO

R 1 y R 2: Listos para su uso. HDLc/ LDLc CAL: No tuvimos que reconstituirlo por que ya lo estaba.

1.- Ajustamos el espectrofotómetro a 570 nm y encendemos el baño. 

2.- Pipeteamos en tubos de ensayo: 

3.- Mezclar e incubar 5 min a 37ºC y leer la absorbancia (A1) del calibrador y la muestra. 

4.- Añadir:

5.- Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC y leer la absorbancia (A2) frente al Blanco de reactivo. Como vemos en este caso hay que realizar dos blancos. Los resultados de las absorbancias fueron: A1 patrón: 0.032 A2 patrón: 0.008 A1 muestra: 0.027 A2 muestra: 0.001

CÁLCULOS.

((A1-A2) Muestra/(A1-A2) patrón) x 33.2 x3

Debido a que hemos echo una dilución 1/3.

(0.027-0.001)/(0.032-0.008) x 33.2 x 3 = 107.9 mg/dL

VALORES DE REFERENCIA.  

                                      Hombres                 Mujeres

Riesgo menor               > 50 mg/dL > 60 mg/dL

Riesgo normal              35 – 50 mg/dL 45 – 60 mg/dL

Riesgo elevado            < 35 mg/dL < 45 mg/dL

OBSERVACIONES Los valores salieron altos pero pensamos que es debido a que hubo que realizar la dilución, lo más recomendable hubiese sido aumentar las cantidades manteniendo la proporción pero no era posible porque somos muchos compañeros y necesitamos más volumen del que disponiamos para ello, se aumentó la cantidad con agua destilada porque con los datos que nos muestra en un primer momento el protocolo el espectrofotómetro no lee bien el paso de luz por la cubeta debido a que como hay tan poca cantidad marca como si no hubiese nada.