PRÁCTICA 16: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE ÁCIDO ÚRICO
23.01.20
OBJETIVO
Determinar la concentración de ácido úrico presente en suero sanguíneo.
FUNDAMENTO
El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y peróxido de hidrógeno (2H2O2) que en presencia de peroxidasa, 4-aminofenazona y 2-4 Diclorofenol Sulfonato (DCPS) forma un compuesto
rosáceo:
La intensidad de quinonaimina roja formada es proporcional a la concentración de ácido úrico
presente en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO
El ácido úrico y sus sales son el producto final del metabolismo de las purinas. En una insuficiencia
renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico. Niveles altos de ácido
úrico son indicativos de patología renal y generalmente se asocia con la gota .
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos.
Material:
R1: Tampón
R2: Enzimas
Calibrador CAL
Muestras:
Suero
Antes de empezar el proceso encendimos el espectrofotómetro y lo pusimos a 520 nm y descongelemos una muestra de suero en el baño.
Primero preparamos el reactivo de trabajo (RT): Para ello se mezcló volúmenes iguales de R1 Tampón y de R2 Enzimas. Primero pasemos un poco de R1 al vial con R2 y tras homogeneizar pasamos esto al vial R1 y homogeneizamos de nuevo.
Una vez preparado el RT rotulamos tubos de ensayo para saber la muestra correspondiente a cada compañero y además nuestro grupo realizó un blanco y un patrón.
Para preparar el patrón depositamos 1 mL de RT, para preparar el patrón depositamos 1 mL de RT y 25 μL de Calibrador Cal, y luego cada uno preparó su muestra con 1 mL de RT y 25 μL de suero.
Se incubó 5 minutos a temperatura ambiente.
Tras ello nos dispusimos a la lectura en el espectrofotómetro.
Primero ajustamos el blanco, y seguidamente el patrón que dio una absorbancia de 0.314, y por ultimo la muestras, la mía dio 0.334.
Por ultimo para calcular la concentración resolvemos la formula
CÁLCULOS:
(Absorbancia muestra/Absorbancia Patrón) x 6 = (0.334/0.314) x6 = 6.38 mg/dL
Comparando el resultado con los valores de referencia observamos que el valor está dentro de los rangos normales.
VALORES DE REFERENCIA:
Suero o plasma:
Mujeres 2,5 - 6,8 mg/dL
Hombres 3,6 - 7,7 mg/dL
Orina: 250 - 750 mg/24 h
OBJETIVO
Determinar la concentración de ácido úrico presente en suero sanguíneo.
FUNDAMENTO
El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y peróxido de hidrógeno (2H2O2) que en presencia de peroxidasa, 4-aminofenazona y 2-4 Diclorofenol Sulfonato (DCPS) forma un compuesto
rosáceo:
La intensidad de quinonaimina roja formada es proporcional a la concentración de ácido úrico
presente en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO
El ácido úrico y sus sales son el producto final del metabolismo de las purinas. En una insuficiencia
renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico. Niveles altos de ácido
úrico son indicativos de patología renal y generalmente se asocia con la gota .
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos.
Material:
- Espectrofotómetro
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Pipetas de 1000 μL y 25 μL
- Baño termostatico
- Gradilla
- Tubos de ensayo
R1: Tampón
R2: Enzimas
Calibrador CAL
Muestras:
Suero
Antes de empezar el proceso encendimos el espectrofotómetro y lo pusimos a 520 nm y descongelemos una muestra de suero en el baño.
Primero preparamos el reactivo de trabajo (RT): Para ello se mezcló volúmenes iguales de R1 Tampón y de R2 Enzimas. Primero pasemos un poco de R1 al vial con R2 y tras homogeneizar pasamos esto al vial R1 y homogeneizamos de nuevo.
Una vez preparado el RT rotulamos tubos de ensayo para saber la muestra correspondiente a cada compañero y además nuestro grupo realizó un blanco y un patrón.
Para preparar el patrón depositamos 1 mL de RT, para preparar el patrón depositamos 1 mL de RT y 25 μL de Calibrador Cal, y luego cada uno preparó su muestra con 1 mL de RT y 25 μL de suero.
Se incubó 5 minutos a temperatura ambiente.
Tras ello nos dispusimos a la lectura en el espectrofotómetro.
Primero ajustamos el blanco, y seguidamente el patrón que dio una absorbancia de 0.314, y por ultimo la muestras, la mía dio 0.334.
Por ultimo para calcular la concentración resolvemos la formula
CÁLCULOS:
(Absorbancia muestra/Absorbancia Patrón) x 6 = (0.334/0.314) x6 = 6.38 mg/dL
Comparando el resultado con los valores de referencia observamos que el valor está dentro de los rangos normales.
VALORES DE REFERENCIA:
Suero o plasma:
Mujeres 2,5 - 6,8 mg/dL
Hombres 3,6 - 7,7 mg/dL
Orina: 250 - 750 mg/24 h
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