PRÁCTICA 8: HEMOGLOBINA GLICOSILADA

14.11.19

OBJETIVO

Realizar una medida de hemoglobina glicosilada utilizando Nyco Card READER II que es un densitómetro de color con una pequeña batería, las respuestas de color son medidas por reflectancia espectral en las tres partes de un espectro visible.

FUNDAMENTO

La hemoglobina glicosilada es una porción de la hemoglobina Hb A1c que se encuentra unida de forma irreversible a la glucosa mediante enlaces covalentes. Se forma dentro de los hematíes siendo su cantidad proporcional a los niveles de glucosa y permanece en ellos hasta que son destruidos. Es una prueba útil para el seguimiento del diabético, ya que es un fiel reflejo de sus niveles de glucosa en los dos últimos meses.
El proceso consiste en hemolizar la muestra para liberar la Hb-glicada del interior del hematíe. La cuantificación puede hacerse por cromatografía o por métodos inmunoturbidimetricos o colorimétricos.
Los valores de referencia son 4,5% a 5,7%.

Material necesario:

• Densitómetro NycoCard
• Tubo de ensayo con sangre total anticoagulada con EDTA
• Gradilla
• Micropipetas y puntas
• Membrana TD con forma circular

Reactivos:

• R1 (Reactivo de trabajo)
• R2 (Solución de lavado)

PROCEDIMIENTO:

Lo primero que hicimos fue preparar el densitómetro, para ello se pone en marcha pulsando On y siempre con el lápiz lector situado en el soporte. Luego el aparato realizará el ajuste automáticamente y mientras lo realiza es importante no tocar el lápiz lector. Cuando se escuche un sonido el ajuste habrá sido completado, si se escucha un doble sonido habrá algún error.

Luego se ajustó el blanco pulsando ENTER y seguimos las instrucciones de la pantalla, fuimos a "Colocar lápiz" y se saca del soporte y se coloca sobre el dispositivo de calibración al color blanco. Se mantiene hasta que se escuche un sonido.

 que vamos a hacer es añadir 5 μL de sangre en un tubo previamente llenado con R1, y tras ello homogeneizamos con la micropipeta y lo dejamos reposar 2,5 min.

Es importante asegurarse de que el tubo se queda vacío después de la mezcla

Lo siguiente es mezclar de nuevo para conseguir una homogénea suspensión y seguidamente se depositan 25 μL de la mezcla sobre el TD pero es importante mantener la pipeta a una distancia de 0,5 cm aproximadamente.

Se esperó unos 10 segundos.

Lo siguiente fue añadirle el R2 o solución de lavado (unos 25 μL) y se esperan otros 10 segundos como mínimo.

Luego se procede a la lectura del resultado. Es muy importante añadir que no deben pasar 5 minutos para leer. 

Para la lectura se realiza con el lápiz lector que se sitúa sobre el agujero de test y el manguito del lápiz se desliza hacia abajo, ahí se inicia la medida. Tras esperar unos segundos nos salió el resultado en la pantalla, el cuál fue de 8,1 %.

Cogiendo muestra de sangre

Añadiendo sangre al tubo

Muestra depositada con solución de lavado

OBSERVACIONES

La medida puede ser que diese un poco alta debido a que por la falta de experiencia tardamos mucho en realizar la lectura al bajar el lápiz lector hacia abajo, pero la técnica empleada fue la correcta.