ANÁLISIS BIOQUÍMICO

24.10.19 OBJETIVO El objetivo es realizar una separación e identificación de los aminoácidos triptófano, alanina, valina y arginina presentes en una muestra mediante una cromatografía de capa fina ascendente. FUNDAMENTO Esta cromatografía es una técnica de separación e identificación de sustancias químicas disueltas en un disolvente (fase móvil) que se mueve sobre una capa delgada de un adsorbente idóneo (fase estacionaria) Material necesario: Láminas de gel de celulosa Disolvente de cromatografía Disolución reveladora: se realiza resuspendiendo ninhidrina en acetona al 0,2 %. Muestra problema (desconocida) Muestra patrón de aminoácidos Vaso de precipitados Micropipeta Atomizador Estufa Reactivos: Butanol Ácido acético Acetona Agua Ninhidrina PROCEDIMIENTO Lo primero que hicimos fue coger unas láminas de gel de celulosa que eran de 5 x 20 y las cortamos por la mitad para obtenerlas de 5 x10 (que era la medida que necesitábamos). Una vez tenemos

23.10.19 OBJETIVO Obtener una medida cuantitativa de glucosa ustilizando la técnica de la hexokinasa (HK) FUNDAMENTO La hexokinasa cataliza las fosforilación de la glucosa por ATP a glucosa-6-fosfato. Esta es reducida a 6-fosfogluconato en presencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa con reducción paralela de NAD a NADH. Se producirá un aumento de la concentración de NADH en el medio es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada. La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo y la insulina facilita su entrada en las células. Material necesario: Micropipeta y puntas Vaso de desechos Gradilla Tubos de ensayo y tapones Baño termostato Espectrofotómetro Reactivos: R1 y R2 (R1 es un tampón y R2 son enzimas) para formar RT (reactivo de trabajo) Muestra de orina Calibrador de glucosa PROCEDIMIENTO Primero encendemos el espectrofotómetro y pasado un rato poner la longitud de onda correspondiente que en

OBJETIVO Con esta práctica de la glucosa oxidasa (GOD) vamos a obtener la cantidad de glucosa en suero sanguíneo, y de esta forma practicar más con el espectrofotómetro. PRINCIPIO La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. El H2O2 producido se detecta mediante un aceptor cromogénico de oxígeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa. FUNDAMENTO La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las células. La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucemia causada por un déficit de insulina. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio. Reactivos; Tampón (R1) Enzimas (R2) Glucosa CAL Material necesario: Gradillas Micropipetas y puntas Vaso de desechos Tubos de ensayo R1 y R2 Patrón PROCEDIMIENTO: 1. Preparar el reactivo de trabajo (RT): Para ello disolvemos el c

DÍA 1 (14.10.19) OBJETIVO El objetivo de esta práctica es aprender la técnica de turbidimetría, la cuál es una de las variantes de la espectrofotometría de dispersión. FUNDAMENTO: La adición de ácido sulfosalicílico a una solución de proteínas actúa sobre estas, dando lugar a la aparición de un fino precipitado en suspensión. Este precipitado se observa como una turbidez blanquecina cuya intensidad puede ser cuantificada por turbidimetría Basándonos en esto vamos a cuantificar la concentración de proteínas presentes en una muestra de orina. Material necesario: Tubos de ensayo (10 mL) Pipetas automáticas con capacidades de 25,50,100,200,400) Cubetas de fotometría Fotómetro. Matraz aforado Vidrio de reloj Embudo Reactivos: Suero salino fisiológico (0,9 g/dL) Ácido sulfosalicílico al 3% (p/v) en agua destilada Patrón de proteínas (7 g/dL) Albúmina bovina Muestra: Orina centrifugada ( 5 minutos a 2000 rpm). Usar el sobrenadante, también puede usarse orina no